В. Укажите диагностическое значение метода.

А. При рН=3(кислая среда) отрицательно заряженные группы R-COO^- переходят в  R-COOH, при этом остаются только положительно заряженные R—NH₃⁺, пептиды перемещаются к катоду или остаются на старте.

а: При pH 3,0 гистидин, аргинин и лизин несут заряд + 2 и движутся к отрицательно заряженному катоду быстрее остальных аминокислот, заряд которых равен + 1, поэтому пептид приближен к катоду. Пептид, в состав которых входят аминокислоты тольк с зарядом +1, останутся на линии старта.

1- к катоду; 2- к катоду; 3- к катоду; 4- на старте; 5- к катоду.

б: При рН=10,0 (щелочная среда) положительно заряженные группы NH₃⁺ переходят в NH₂, при этом остаются только отрицательно заряженные  

R-COO^-, пептиды перемещаются к аноду или остаются на старте. При рН=10,0 глутамат будет иметь заряд -2 и двигаться к положительно заряженному аноду быстрее остальных аминокислот, имеющих заряд -1. Пептиды имеющие в своем составе только аминокислоты с зарядом -1 останутся на старте.

1- на старте; 2- к аноду; 3- к аноду; 4- к аноду; 5- на старте.

 

Б. Электрофорез – явление перемещения частиц коллоидных растворов под действием внешнего электрического поля.

Виды: электрофорез в жидкостях, на бумаге и в блоках (крахмальном, полиакриламидном и т.д.)

Электрофорез на бумаге осуществляется на листах (полосках) хроматографической или фильтровальной бумаги, концы которой опущены в электродные камеры. Разделяемая смесь наносится на бумагу в виде пятна либо узкой зоны. По способу отведения теплоты, выделяющейся при прохождении через бумагу электрич. тока, используют приборы: с охлаждающими пластинами из изолирующих материалов; с охлаждающей несмешивающейся с водой орг. жидкостью, например керосином; с естеств. охлаждением бумаги на воздухе или во влажной камере.

В отличие от электрофореза на бумаге, где скорость движения белков пропорциональна только их суммарному заряду, в полиакриламидном геле скорость движения белков пропорциональна их молекулярным массам.

Разрешающая способность электрофореза в полиакриламидном геле выше, чем на бумаге. При электрофорезе белков сыворотки крови человека на бумаге обнаруживают только 5 главных фракций. Электрофорез тех же белков в полиакриламидном геле позволяет получить до 18 различных фракций. Электрофорез проводят в тонком слое полиакриламида. После завершения электрофореза, зоны белков выявляют c помощью красителя.

Электрофорез белков крови используют для определения белковых фракций крови. Принцип разделения белков сыворотки крови на фракции состоит в том, что в электрическом поле белки сыворотки крови движутся по смоченной буферным раствором хроматографической бумаге (ацетатцеллюлозной пленке, крахмаловому, агаровом гелям) со скоростью, зависящей в основном от величины электрического заряда и молекулярной массы частиц. Унифицированным методом является электрофорез на пленках из ацетата целлюлозы. При помощи данного метода белки сыворотки крови можно разделить на 5 фракций в соответствии с уменьшением их электрофоретической подвижности(альбумины, альфа-1-глобулины, альфа-2-глобулины, бета-глобулины, гамма-глобулины). Альбумины – самая большая и наиболее быстро движущаяся к аноду фракция, далее следует a₁-глобулины, a₂-глобулины_, b-глобулины, g-глобулины – наиболее медленно движущаяся к аноду фракция.

В. Это исследование в диагностическом отношении более информативно чем определение только общего белка или альбумина. При многих заболеваниях изменяется процентное соотношение белковых фракций, хотя общее содержание белка в сыворотке крови остается в пределах нормы. Процентное соотношение белковых фракций на электрофореграммах следующее: альбумины – (55,5% ± 4,5%), a₁-глобулины – (4,8% ± 1,3%), a₂-глобулины – (9,6% ± 1,7%), b-глобулины – (11,8% ± 2,8%), g-глобулины – (17,6% ± 2,3%). Анализ фореграммы белков позволяет установить, за счет какой фракции происходит увеличение или дефицит белка, а также судить о специфичности изменений, характерных для данной патологии. Исследование белковых фракций, позволяет судить о характерном для какого-либо заболевания избытке или дефиците белка только в самой общей форме.

При анализе результатов исследования сыворотки крови на белковые фракции выявляются три типа нарушений:

1. Диспротеинемия (изменение соотношения белковых фракций)

2. Генетические дефекты синтеза белков

3. Парапротеинемия (аномальные белки в крови)

5