![]() Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву ![]() Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Работа 3. Обнаружение активности каталазы в растительном материале.
Цель: обнаружить и сравнить активность каталазы в различном растительном материале.
Объекты, реактивы, оборудование: листья комнатных растений разного возраста, сухие, набухшие и наклюнувшиеся семена ячменя, проростки различных двудольных растений, клубни и корнеплоды; 3% Н2О2, песок для растирания ткани; пробирки; цилиндры на 10 мл, фарфоровые ступки с пестиком, воронки, пробочные сверла, держатели и штативы для пробирок. Краткие сведения Фермент каталаза относится к классу оксидоредуктаз. Он представляет собой железопротеид. Небелковая часть, как у пероксидазы, представлена железопорфирином. Деятельность каталазы в живой клетке сопряжена с активностью флавопротеидов __ важнейшего звена ЭТЦ дыхания. Каталаза расщепляет токсичную для живой клетки перекись водорода, образующуюся как побочный продукт деятельности флавопротеидов в пероксисомах. Реакция идет согласно уравнению каталаза
Полагают, что в очень мясистых тканях, лишенных достаточного доступа кислорода, каталаза играет роль поставщика последнего, генерируя его из перекиси водорода. Ход работы Из листа растения пробочным сверлом диаметром 1 см сделать 5 высечек, не захватывая крупные жилки. При работе с мясистыми органами растений (клубни, корнеплоды), перед тем как делать высечки, следует нарезать ткань пластинками толщиной 4–5 мм. Диски растереть в ступке с добавлением небольшого количества воды (до 1 мл). Если ткань жесткая, добавить немного песка. К растертой кашице прилить 5 мл воды тщательно перемешать и профильтровать в чистую пробирку через увлажненный складчатый фильтр. Для работы достаточно 3–4 мл вытяжки фермента. Добавить к вытяжке 2 мл 3% перекиси водорода. В результате разложения перекиси водорода ферментом выделяются пузырьки кислорода, дающие хорошо заметную пену. Для сравнения активности каталазы в различных объектах следует брать равное по сухой массе количество материала. Активность фермента оценить в баллах: интенсивное образование пены __ 4 балла, умеренное __ 3, слабое __ 2, очень слабое __ 1 балл, отсутствие активности __ 0 баллов. Результаты записать по форме табл.1. Таблица 1
Используя активность каталазы как косвенный показатель интенсивности дыхания, сделать вывод о зависимости активности каталазы и (косвенно) интенсивности дыхания от изучаемых внутренних и внешних факторов.
Задача. Определить активность каталазы: 1) в молодых, зрелых и старых листьях; 2) в зрелых листьях различных видов растений (хлорофитум, узумбарская фиалка, пеларгония); 3) в различные органах растения (корень, стебель, лист); 4) в наружных и внутренних частях мясистых органов растений (клубни, корнеплоды); 5) в сухих, набухших и наклюнувшихся семенах ячменя. Общие результаты работы по вариантам записать по образцу табл.1, вычислить среднюю для каждого варианта.
Работа 4. Обнаружение активности пероксидазы Цель: обнаружить и сравнитьактивность пероксидазы в различных растительных объектах
Объекты, реактивы, оборудование: листья разного возраста, проростки растений, клубни картофеля, корнеплоды, сухие и наклюнувшиеся семена; 0,3% Н2О2, раствор бензидина; пробирки, воронки, пипетки на 2 мл, штативы для пробирок, ступки фарфоровые, лезвия, фильтровальная бумага. Краткие сведения Пероксидаза является протеидом, состоящим из белка и простетической группы – железопорфирина. Установлено, что пероксидаза катализирует окисление различных циклических (фенолы, ароматические амины) и гетероциклических соединений кислородом перекиси водорода. Реакция идет согласно уравнению: Перекись водорода образуется в клетке как побочный продукт каталитической деятельности флавиновых дегидрогеназ в электрон-транспортной цепи дыхания. Таким образом, деятельность пероксидазы по утилизации токсичной для клетки перекиси водорода косвенно связана с основной ЭТЦ дыхания. Вместе с тем установлено, что пероксидаза способна функционировать как типичная оксидаза, катализируя окисление субстрата кислородом воздуха: Е пероксидаза
Н+ пероксидаза е- 1/2О2→ →Н2О
Так, пероксидаза с одной стороны, может окислять кислородом воздуха НАД·Н2, с другой ___ передавать электроны, полученные от него, на различные акцепторы (например, на цитохром С). В обоих случаях пероксидаза является звеном ЭТЦ дыхания.
Пероксидаза обнаружена практически во всех органоидах клетки и в цитоплазме. Ее легко выделить растиранием растительной ткани в воде или ацетатном буфере (рН 5,4). Обнаружение активности пероксидазы основано на ее способности в присутствии Н2О2 окислять бесцветные фенольные соединения до окрашенных хинонов. Ход работы При определении активности пероксидазы растительную ткань (около 200 мг) растереть в ступке с водой, слить в пробирку и довести водой до 5 мл. Для сравнения активности пероксидазы в различных объектах следует брать равное по сухой массе количество материала. Полученную смесь отфильтровать в сухую пробирку через увлажненный складчатый фильтр. Количество фильтрата должно быть около 2 мл. К этой вытяжке добавить 2 мл 0,3% перекиси водорода и 2 мл 1,5% раствора бензидина. Встряхнуть пробирку и через 30 с определить интенсивность посинения по 4-балльной шкале. Результаты записать по форме табл.1. Таблица 1
Сделать вывод об активности пероксидазы в исследуемых объектах. Задача. Изучить активность пероксидазы в зависимости: 1) от степени прорастания семян (сухие, наклюнувшиеся); 2) от видовой специфики запасающей ткани разных видов растений (мякоть картофеля, яблока, моркови); 3) от типа ткани определенного органа (кожура, глазки, мякоть клубня картофеля); 4) от возраста листа (молодой, зрелый, старый).
|
||||||||||||||
Последнее изменение этой страницы: 2016-12-30; просмотров: 1326; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.216.37.123 (0.009 с.) |