Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Построение калибровочной кривой
Для построения калибровочной кривой используют чистые препараты белка, например, кристаллические препараты гемоглобина, бычьего сывороточного альбумина и другие. Для приготовления исходного раствора белка отвесить 0,1 г стандартного белка и растворить в 100 мл дистиллированной воды. Раствор отфильтровать. Точную концентрацию приготовленного раствора устанавливают по методу Кьельдаля. Для этого берут на сжигание в колбы Кьельдаля 3 пробы исходного раствора белка по 5 мл. приливают в колбу 7 мл концентрированной Н2SО4 d=1,84. Равномерное озоление пробы начинается уже при комнатной температуре, залитые навески оставляют на ночь. На следующий день колбы ставят на электроплитку и проводят постепенное сжигание в начале при слабом нагреве, затем при сильном, осторожно взбалтывая. Сжигание проводят в присутствии катализатора (2-3 мл перекиси водорода), до полного обесцвечивания раствора. Содержимое колбы Кьельдаля количественно переносят горячей дистиллированной водой в мерную колбу на 500 мл, охлаждают, перемешивают и доводят раствор в колбе до метки. Содержание в растворе аммония устанавливают по калибровочной кривой образцовых растворов. Для ее построения одновременно с испытуемым раствором готовят образцовые растворы. В мерные колбы на 100 мл помещают 0,2; 0,5; 1; 2; 4 мл рабочего образцового раствора NH4Cl, затем 4 мл раствора сегнетовой соли, добавляют воды до половины объема, 4 мл реактива Несслера и доводят объем дистиллированной водой до метки. Образцовый раствор NH4Cl готовят растворением 0,7405 г химически чистого перекристаллизованного аммония хлористого в дистиллированной безаммиачной воде и доводят объем до 1 л, 20 мл этого раствора переносят в мерную колбу на 1 л, доводят объем до метки; 1 мл этого раствора содержит 0,005 мг NH4+, его используют для приготовления образцовых растворов. Просмотр окраски производят через 10 минут после прибавления реактива Несслера на приборе фотоколориметре: КФК-3 при длине волны λ=400 нм. Содержание аммонийного азота рассчитывают по формуле: где - количество азота по графику, мг; - общий объем раствора, мл (500); Н – навеска, г; С – объем раствора, взятый для окрашивания, мл (10). При пересчете содержания азота на белок используют универсальный белковый коэффициент – 6,25.
Из исходного раствора методом разведения приготовить растворы с меньшим содержанием белка по приведенной схеме. Для этого условно принимают концентрацию исходного раствора белка за 100 единиц. 1. Исходный раствор – 100 ед. белка 2. 8 мл р-ра 1 + 2 мл Н2О – 80 ед. белка 3. 7 мл р-ра 1 + 3 мл Н2О – 70 ед. белка 4. 6 мл р-ра 1 + 4 мл Н2О – 60 ед. белка 5. 5 мл р-ра 1 + 5 мл Н2О – 50 ед. белка 6. 5 мл р-ра 2 + 5 мл Н2О – 40 ед. белка 7. 5 мл р-ра 3 + 5 мл Н2О – 35 ед. белка 8. 5 мл р-ра 4 + 5 мл Н2О – 30 ед. белка 9. 5 мл р-ра 5 + 5 мл Н2О – 25 ед. белка 10. 5 мл р-ра 6 + 5 мл Н2О – 20 ед. белка 11. 5 мл р-ра 8 + 5 мл Н2О – 15 ед. белка 12. 5 мл р-ра 10 + 5 мл Н2О – 10 ед. белка 13. 5 мл р-ра 11 + 6 мл Н2О – 5 ед. белка Во всех приготовленных растворах провести определение белка по методу Лоури. В качестве контроля использовать пробу, в которой вместо раствора белка была взята дистиллированная вода. Результаты занести в таблицу 14. Таблица 14.
По полученным данным на миллиметровой бумаге построить калибровочную кривую в координатах «оптическая плотность – концентрация белка». Калибровочная кривая используется для определения белка при выполнении работы.
Оформление результатов Полученные результаты записать в таблицу 15. Таблица 15.
5.4 Контрольные вопросы 1. Какие белки называют запасными белками семян растений? 2. Назовите характерные особенности белков пшеницы глиадина и глютенина. 3. Какова роль клейковины в определении хлебопекарных достоинств пшеницы? 4. Назовите аминокислотный состав белков клейковины. 5. Назовите характерные особенности и показатели качества клейковины. 6. Что такое глютатион? 7. Перечислите функции глютатиона в обмене веществ. Литература [1, c.112-124]
|
|||||||||||||||||||||||
Последнее изменение этой страницы: 2017-01-18; просмотров: 403; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 13.59.26.152 (0.005 с.) |